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用冷凍研磨器研磨甘蔗葉提取RNA
甘蔗是世界上最為重要的糖料作物,而且還是最具發展潛力的綠色能源原料。
RNA提取是植物分子生物學和基因工程研究的前提,獲得完整、純度高的基因組RNA對研究的成功十分重要。
目前發表的關于植物RNA提取的文獻很多,但不同植物和植物自身的不同部位都有其各自的特點,很難用一種方法來提取不同植物的RNA,甘蔗基因組RNA的提取是進行甘蔗分子生物學研究的基礎,但由于甘蔗含有大量的酚和多糖等有機物質,這些物質極大的干擾RNA的提取。
按照常規提取植物組織總RNA的方法提取甘蔗基因組RNA常常因產量小和純度低而不能滿足實驗要求。
影響甘蔗RNA提取質量的另一個重要因素是提取材料,因為老的植物組織通常含有較多糖類及其他雜質,此外甘蔗莖在液氮中研磨困難整節硬化)和莖節1~ 3節、根易褐化,導致甘蔗莖總RNA的提取質量差和根中提取RNA量少。所以提取甘蔗基因組總RNA的材料應盡量取用甘蔗嫩葉或把甘蔗莖榨成蔗汁團。此外,為了避免外源RNA的污染,要盡量避免操作環境人員流動帶來的污染,定期對操作環境進行滅菌處理,還要盡可能地縮短實驗過程,減少實驗步驟因。
因甘蔗葉片纖維含量比較高,所以傳統的研磨方式很難研磨,且研磨過程中RNA容易降解,而冷凍研磨儀正好解決此類難題。傳統的方式是手工研磨,因為樣本體積小,又比較珍貴,手工研磨樣本損失比較嚴重,提出的RNA濃度非常低,所以冷凍研磨儀,樣本零損失,而且操作簡單便捷,可以批量處理,很好的解決了實驗上提取RNA的問題。